| 1. | 實驗進行前，無菌室及無菌操作台（laminar flow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70% ethanol擦拭無菌操作抬面，並開啟無菌操作台風扇運轉10分鐘後，才開始實驗操作。 |
| 2. | 每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共用培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。 |
| 3. | 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其他實驗用品用完即應移出，以利於氣流之流通。實驗用品以70% ethanol擦拭後才帶入無菌操作台內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域，勿在邊緣之非無菌區域操作。 |
| 4. | 小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。 |
| 5. | 實驗完畢後，將實驗物品帶出工作台，以70% ethanol擦拭無菌操作檯面。操作間隔應讓無菌操作台運轉5-10分鐘後，再進行下一個細胞株之操作。 |
| 6. | 工作人員應注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套後才進行實驗。對於來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作，並選擇適當等級之無菌操作台（至少Class II）。操作過程中，應避免引起aerosol之產生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，並避免尖銳針頭之傷害等。 |
| 7. | CO2培養箱 ： 7.1. 細胞培養是否需二氧化碳供應，依細胞培養基種類而異。 7.2. 若細胞培養基以碳酸鹽為pH緩衝系統，則需補充二氧化碳以達到緩衝作用，應培養細胞於二氧化碳環境下，例如使用二氧化碳培養箱﹙常用之比例為5% CO2，95% air﹚，或是 灌入適量二氧化碳至培養容器內，放入一般培養箱中培養即可。為使二氧化碳能夠流通，培養瓶(例如T-flask)放入二氧化碳培養箱時應鬆開瓶蓋，或使用透氣瓶蓋。取出觀察時，則關緊瓶蓋，以避免污染。 7.3. 若細胞培養基含有其他緩衝物質而不需二氧化碳供應，則放在一般培養箱中培養即可。 7.4. 培養箱內可放置水盤以維持適量之溼度，避免因培養基蒸發造成鹽類濃度之變化而影響細胞生長。 |
| 8. | 定期檢測下列項目： 8.1. 無菌操作台：注意airflow壓力，定期更換紫外線燈管、HEPA過濾膜及prefilter預濾網﹙300小時/預濾網，3000小時/HEPA﹚。 8.2. CO2培養箱：CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染。 8.3. CO2鋼瓶：CO2壓力 8.4. 恆溫水槽：定期換水 |
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資料提供：食品工業發展研究所 生物資源保存及研究中心 |
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