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收到細胞株的處理方式

一、 冷凍細胞活化︰
1. 收到細胞株冷凍包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有解凍情形，請立即通知生資中心。收到細胞株後請儘速開始培養， 或先置於-70°C，隔天後再移到液氮保存。
2. 依據細胞株資料單指定之培養基種類、血清種類和其他指定之成份和比例， 製備培養基。絕大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養基或不同之血清種類，若因實驗需要，必須有所不同時，務必以緩慢比例漸次改變培養基組成， 確定細胞適應後，方進行所需之實驗。
3. 對細胞而言，fetal bovine serum (胎牛血清)、calf serum (小牛血清) 和 horse serum(馬血清) 彼此之差異極大，請務必依據細胞株資料單指定之血清種類培養之。
4. 冷凍細胞解凍程序:

4.1

將冷藏之培養基置於 37°C 水槽中回溫 (或其他適當之培養溫度)，回溫後以 70% ethanol擦拭之， 移入無菌操作台內。自液氮槽或 -80°C 冰箱取出冷凍管，立即放入 37°C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在 1 分鐘內全部融化後， 以 70% ethanol 擦拭冷凍管外部，移入無菌操作台內。

4.2

依據細胞種類和濃度，於無菌操作台內取適量培養基加至適當之培養瓶中。 緩慢加入已解凍之細胞懸浮液，與培養基混合均勻後，放入培養箱培養。
5. 對絕大多數細胞而言，1% 以下之冷凍保護劑 (DMSO)，不會對細胞之貼附或活化有不良影響， 不需立刻由解凍細胞中去除， 待第二天確定細胞生長或貼附良好後再去除即可。 惟對極少數因對 DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞，需立即去除 DMSO 者，則可將解凍後之細胞懸浮液放入 5~10 ml 培養基中，離心 300xg (約 1000 rpm)，5 分鐘後，小心移去上清液，加入適量新鮮培養基，將細胞均勻混合後，轉移至培養瓶中，再放入培養箱培養。
二、 處理置於 T25 flask 之吸附型細胞︰
1. 於寄送過程中，為避免起泡造成細胞脫落死亡，T25 flask 均加滿新鮮培養基， 同時為避免污染，亦會在寄送前於培養基內添加抗生素 (100 units/ml penicillin + 100 μg/ml streptomycin)。請在收件後檢查 flask 是否有破損或培養基外漏情形，並於顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現象，若有異常問題，不要打開蓋子，請立即通知食品所生資中心。
2. 將原封之 T25 flask 靜置於培養箱中，使細胞回溫至 37°C (或其他適當之培養溫度)， 並讓運送過程中少數脫落的細胞可再附著生長。隔天後， 於無菌操作台內取出 flask 內之培養基，僅留約 5~10 ml 培養基於 flask 內，依一般培養方式培養之，若細胞已長滿盤，則將細胞做繼代培養。
3. 若欲重覆使用上述取出之培養基，則必須注意無菌操作，或再以 0.1 μm 或 0.2 μm 之過濾膜過濾之。
三、 處理置於離心管之懸浮型細胞︰
1. 懸浮型細胞，在培養至足夠數量後，通常會分裝至 15 ml 離心管以方便運送。
2. 於寄送過程中，為避免污染，會在寄送前於新鮮培養基內添加抗生素 (100 units/ml penicillin + 100 μg/ml streptomycin)。請在收件後檢查 是否有破損或培養基外漏情形，若有異常問題，不要打開蓋子，請立即通知食品所生資中心。
3. 若離心管外觀正常，則在無菌操作台內取出培養基與沉澱之細胞，直接置於適當之培養容器內， 或加入適量培養基稀釋培養，依一般培養方式培養之。
 資料提供：食品工業發展研究所 生物資源保存及研究中心
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