| 1. | 粉末培養基配製： | ||
| 1.1 | 說明： | ||
| 1.1.1 | 若培養基以碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)為pH緩衝系統，則需另外添加碳酸氫鈉至培養基中。配製時若將 碳酸氫鈉粉末直接加入培養基中，容易造成pH之誤差，或局部過鹼。因此建議粉末培養基及碳酸氫鈉粉末應分別溶解後才混合， 然後用CO2氣體調整pH，而非用強酸（例如HCl）或強鹼（例如NaOH）。 | ||
| 1.1.2 | 細胞培養基除了以碳酸氫鈉為pH緩衝系統，亦可使用其他緩衝物質，配製此類培養基則不須添加碳酸氫鈉亦不須使用CO2氣體調整pH。 | ||
| 1.2 | 材料： | ||
| 1.2.1 | 純水(milli-Q 水或二次至三次蒸餾水，水品質非常重要) | ||
| 1.2.2 | 粉末培養基 | ||
| 1.2.3 | 碳酸氫鈉(sodium bicarbonate) | ||
| 1.2.4 | 電磁攪拌器 | ||
| 1.2.5 | 無菌玻璃瓶 | ||
| 1.2.6 | 0.1或0.2 μm無菌過濾膜 | ||
| 1.2.7 | pH meter | ||
| 1.2.8 | 真空幫浦 | ||
| 1.2.9 | CO2鋼瓶 | ||
| 1.3 | 步驟(以1升為例)： | ||
| 1.3.1 | 細胞培養基通常須添加10%血清，為預留此體積，因此粉末培養基之配製體積為900 ml。 | ||
| 1.3.2 | 取粉末培養基溶於700ml milli-Q水中，攪拌使其溶解。 | ||
| 1.3.3 | 稱取1.5 g/L 之碳酸氫鈉粉末（一般最終濃度為1.5 g/L，但若有特殊濃度，則依該培養基之需求而加入適當之碳酸氫鈉）溶於200ml milli-Q水中，攪拌使其溶解，然後通入CO2氣體至飽和，約10-30秒。 | ||
| 1.3.4 | 將溶解且含飽和CO2之碳酸氫鈉溶液加入溶解之液體培養基中混合。混合後溶液之pH應為7.2-7.4，除非pH值偏差太大，否則不需用酸鹼再調整之。若為太鹼，可再通入CO2氣體調整pH。過濾後，一般pH會上升0.1左右。 | ||
| 1.3.5 | 以0.1或0.2 μm無菌過濾膜過濾培養基，並分裝至已標示之無菌玻璃瓶中，貯存於4℃（血清亦可加入培養基中一起過濾）。 | ||
| 1.3.6 | 培養基標籤應標示培養基種類、廠牌、貨號(catalog number)、批號(lot number)、配製日期與瓶號。 | ||
| 1.3.7 | 取樣培養基測試其pH及滲透壓，並檢測生物污染。 | ||
| 1.3.8 | 細胞培養基應置於2~8℃避光保存。若出現沉澱或過期，則應捨棄不用。實驗進行前放在37℃水槽中溫熱後才使用之。 | ||
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資料提供：食品工業發展研究所 生物資源保存及研究中心 |
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